Эсийн өсгөвөрийн гол давуу талуудын нэг нь эсийн нөхөн үржихүйн физик хими (өөрөөр хэлбэл температур, рН, осмосын даралт, O2 ба CO2-ийн хүчдэл) болон физиологийн орчин (өөрөөр хэлбэл гормон, шим тэжээлийн агууламж) -ийг зохицуулах чадвар юм.Температураас гадна өсгөвөрлөх орчныг өсөлтийн орчин зохицуулдаг.
Өсгөвөрлөлийн физиологийн орчин нь түүний физик, химийн орчин шиг тодорхой бус боловч ийлдэсийн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн талаар илүү сайн ойлголттой болох, үржихэд шаардлагатай өсөлтийн хүчин зүйлсийг тодорхойлох, өсгөвөрт байгаа эсийн бичил орчныг илүү сайн ойлгох явдал юм.(өөрөөр хэлбэл эсийн харилцан үйлчлэл, хийн тархалт, матрицтай харилцан үйлчлэлцэх) нь одоо тодорхой эсийн шугамыг ийлдэсгүй орчинд өсгөвөрлөх боломжийг олгодог.
1.Соёлын орчин эсийн өсөлтөд нөлөөлдөг
Эсийн өсгөвөрлөх нөхцөл нь эсийн төрөл бүрийн хувьд өөр өөр байдаг гэдгийг анхаарна уу.
Тодорхой эсийн төрөлд шаардлагатай өсгөвөрлөх нөхцлөөс гажсан үр дагавар нь хэвийн бус фенотипийн илрэлээс эсийн өсгөвөр бүрэн бүтэлгүйтэх хүртэл байдаг.Тиймээс бид танд сонирхож буй эсийн шугамтай танилцаж, туршилтанд хэрэглэж буй бүтээгдэхүүн бүрийн зааврыг чанд дагаж мөрдөхийг зөвлөж байна.
2. Өөрийн эсүүдэд оновчтой эсийн өсгөвөрлөх орчинг бүрдүүлэхэд анхаарах зүйлс:
Өсгөвөрлөгч ба ийлдэс (дэлгэрэнгүй мэдээллийг доороос үзнэ үү)
рН ба CO2 түвшин (дэлгэрэнгүй мэдээллийг доороос үзнэ үү)
Хуванцар тариалах (дэлгэрэнгүй мэдээллийг доороос үзнэ үү)
Температур (дэлгэрэнгүй мэдээллийг доороос үзнэ үү)
2.1 Соёлын хэрэгсэл ба ийлдэс
Өсгөвөрлөгч нь эсийн өсөлтөд шаардлагатай шим тэжээл, өсөлтийн хүчин зүйл, гормоныг хангаж, өсгөвөрийн рН, осмосын даралтыг зохицуулдаг тул өсгөвөрлөх орчны хамгийн чухал хэсэг юм.
Хэдийгээр эсийн өсгөвөрлөх анхны туршилтыг эд эсийн ханд болон биеийн шингэнээс гаргаж авсан байгалийн орчинг ашиглан хийсэн боловч стандартчилал, зөөвөрлөгчийн чанар, эрэлт хэрэгцээ нэмэгдсэн нь тодорхой орчинг хөгжүүлэхэд хүргэсэн.Үндсэн гурван төрлийн хэвлэл мэдээллийн хэрэгсэл нь суурь орчин, сийвэнгийн багассан орчин, ийлдэсгүй орчин бөгөөд ийлдсийн нэмэлт тэжээлд өөр өөр шаардлага тавьдаг.
2.1.1 Үндсэн хэрэгсэл
Gibco эсийн өсгөвөрлөгч
Ихэнх эсийн шугам нь амин хүчил, витамин, органик бус давс, нүүрстөрөгчийн эх үүсвэр (глюкоз гэх мэт) агуулсан үндсэн тэжээлт орчинд сайн ургадаг боловч эдгээр үндсэн тэжээлт бодисуудын найрлагад ийлдэс нэмж өгөх ёстой.
2.1.2 Сийвэнгийн орчин бууруулсан
Gibco Low Serum Medium бүхий лонх
Эсийн өсгөвөрлөх туршилтанд ийлдсийн сөрөг нөлөөг бууруулах өөр нэг стратеги бол ийлдэс багассан орчинг ашиглах явдал юм.Сийвэнгийн бууруулсан орчин нь шим тэжээл, амьтны гаралтай хүчин зүйлээр баялаг үндсэн дунд томъёо бөгөөд шаардлагатай ийлдсийн хэмжээг бууруулдаг.
2.1.3 Ийлдэсгүй орчин
Gibco серум агуулаагүй савтай
Ийлдэсгүй орчин (SFM) нь ийлдсийг зохих тэжээл, дааврын найрлагаар орлуулах замаар амьтны ийлдэс хэрэглэхээс зайлсхийдэг.Хятадын шишүүхэй өндгөвчний (CHO) рекомбинант уургийн үйлдвэрлэлийн шугам, төрөл бүрийн эрлийз эсийн шугам, шавьжны Sf9 ба Sf21 (Spodoptera frugiperda), түүнчлэн вирус үйлдвэрлэх хост зэрэг олон анхдагч өсгөвөр болон эсийн шугамууд ийлдэсгүй дунд найрлагатай байдаг. (жишээ нь: 293, VERO, MDCK, MDBK) гэх мэт.Ийлдэсгүй орчинг ашиглахын нэг гол давуу тал нь өсөлтийн хүчин зүйлийн зохистой хослолыг сонгон тухайн эсийн тодорхой төрлүүдэд тохирох тэжээлийг сонгох чадвартай болгох явдал юм.Дараах хүснэгтэд ийлдэсгүй зөөвөрлөгчийн давуу болон сул талуудыг жагсаав.
Давуу тал
Тодорхой байдлыг нэмэгдүүлэх
Илүү тогтвортой гүйцэтгэл
Цэвэршүүлэх, боловсруулахад хялбар
Эсийн үйл ажиллагааг зөв үнэлэх
Бүтээмжийг нэмэгдүүлэх
Физиологийн урвалыг илүү сайн хянах
Сайжруулсан эсийн медиа илрүүлэх
Сул тал
Эсийн төрлийн тусгай дунд томъёоны шаардлага
Урвалжийн өндөр цэвэршилт хэрэгтэй
Өсөлтийн удаашрал
2.2.1 рН түвшин
Ихэнх хэвийн хөхтөн амьтдын эсийн шугамууд рН 7.4-т сайн ургадаг бөгөөд өөр өөр эсийн шугамын ялгаа бага байдаг.Гэсэн хэдий ч зарим өөрчлөгдсөн эсийн шугам нь бага зэрэг хүчиллэг орчинд (рН 7.0 - 7.4) илүү сайн ургадаг бол зарим хэвийн фибробласт эсийн шугам нь бага зэрэг шүлтлэг орчинг (рН 7.4 - 7.7) илүүд үздэг.Sf9, Sf21 зэрэг шавьжны эсийн шугамууд рН 6.2-д хамгийн сайн ургадаг.
2.2.2 CO2-ын түвшин
Өсөлтийн орчин нь өсгөвөрийн рН-ийг хянаж, рН-ийн өөрчлөлтийг эсэргүүцэхийн тулд өсгөвөрт байгаа эсийг буфер болгодог.Ихэвчлэн органик (жишээлбэл, HEPES) эсвэл СО2-бикарбонатад суурилсан буферийг агуулж байж ийм буфержилтийг хийдэг.Орчны рН нь ууссан нүүрстөрөгчийн давхар исэл (CO2) ба бикарбонатын (HCO3-) нарийн тэнцвэрт байдлаас хамаардаг тул агаар мандлын CO2-ийн өөрчлөлт нь орчны рН-ийг өөрчилнө.Иймд СО2-бикарбонат дээр суурилсан буфертэй буфертэй орчинг ашиглахдаа, ялангуяа задгай өсгөвөрийн аяганд эсийг өсгөвөрлөх эсвэл хувирсан эсийн шугамыг өндөр концентрацитай өсгөвөрлөхөд экзоген CO2 ашиглах шаардлагатай.Ихэнх судлаачид агаарт ихэвчлэн 5-7% CO2 ашигладаг боловч ихэнх эсийн өсгөвөрлөх туршилтууд нь ихэвчлэн 4-10% CO2 ашигладаг.Гэсэн хэдий ч орчин бүр нь зөв рН болон осмосын даралтыг бий болгохын тулд CO2-ийн хурцадмал байдал ба бикарбонатын концентрацийг санал болгодог;Дэлгэрэнгүй мэдээллийг дунд үйлдвэрлэгчийн заавраас авна уу.
2.3 Хуванцар тариалах
Эсийн өсгөвөрлөх хуванцарыг янз бүрийн эсийн өсгөвөрлөх хэрэглээнд тохируулахын тулд янз бүрийн хэлбэр, хэмжээ, гадаргуутай байдаг.Доорх эсийн өсгөвөрийн хуванцар гадаргуугийн гарын авлага болон эсийн өсгөвөрлөх савны гарын авлагыг ашиглан эсийн өсгөвөрлөхдөө тохирох хуванцарыг сонгоход тусална уу.
Thermo Scientific Nunc эсийн өсгөврийн бүх хуванцарыг үзэх (зар сурталчилгааны холбоос)
2.4 Температур
Эсийн өсгөвөрлөх оновчтой температур нь эсийг тусгаарлаж буй эзний биеийн температураас ихээхэн хамаардаг ба температурын анатомийн өөрчлөлтөөс бага зэрэг хамаардаг (жишээлбэл, арьсны температур араг ясны булчингийн температураас бага байж болно). ).Эсийн өсгөвөрийн хувьд хэт халалт нь хэт халалтаас илүү ноцтой асуудал юм.Тиймээс инкубатор дахь температурыг ихэвчлэн хамгийн оновчтой температураас бага зэрэг тогтоодог.
2.4.1 Төрөл бүрийн эсийн шугамын оновчтой температур
Ихэнх хүний болон хөхтөн амьтдын эсийн шугамыг оновчтой өсөлтийн тулд 36 ° C-аас 37 ° C-д хадгалдаг.
Шавжны эсийг 270С-ийн температурт ургуулж, өсөлтийг оновчтой болгодог;Тэд бага температурт, 27 ° C-аас 30 ° C-ийн температурт илүү удаан ургадаг.30 хэмээс дээш температурт шавьжны эсийн амьдрах чадвар буурч, 27 хэмд буцсан ч эс сэргээгдэхгүй.
Шувууны эсийн шугам хамгийн их өсөлтөд хүрэхийн тулд 38.5 ° C шаардлагатай.Хэдийгээр эдгээр эсийг 37 хэмд хадгалах боломжтой боловч илүү удаан өсөх болно.
Хүйтэн цуст амьтдаас (хоёр нутагтан, хүйтэн усны загас гэх мэт) үүссэн эсийн шугам нь 15 ° C-аас 26 ° C хүртэл өргөн температурыг тэсвэрлэдэг.
Шуудангийн цаг: 2023-02-01